Mons. José Mazuelos nació en Osuna (Sevilla) el 9 de octubre de 1960. Antes de iniciar los estudios eclesiásticos se licenció en Medicina (1983) y ejerció como médico en su pueblo natal y, durante el servicio militar, en el Hospital Militar de San Carlos de San Fernando (Cádiz). Desde 1985 a 1990 cursó los estudios eclesiásticos en el Seminario de Sevilla y fue ordenado sacerdote el
17 de marzo. Es Licenciado (1995) y Doctor (1998) en Teología Moral por la Academia Alfonsiana -Pontificia Universidad Lateranense-, en Roma. También en Roma realizó el curso de Perfeccionamiento en Bioética en la Facultad de Medicina Gemelli.
Su primer destino sacerdotal fue como Párroco en la Parroquia rural de San Isidro, Labrador, de El Priorato de Lora del Río, de 1990 a 1993. Después se trasladó a Roma para ampliar estudios y a su regreso, en 1998, fue nombrado Párroco de Santa María de las Nieves de Benacazón y Subdirector del Servicio de Asistencia religiosa de la Universidad de Sevilla, del que actualmente, y desde el año 2000, es Director. También desde el año 2000 es Delegado Diocesano para la Pastoral Universitaria y Director Espiritual de la Hermandad de los Estudiantes de la Universidad Hispalense. Además, y desde el año 2002, es Canónigo Penitenciario de la Catedral de Sevilla.